يا هناك ، زملائه عشاق الخلية! كمورد لخلايا Tet - 213 ، كان لدي نصيب عادل من التجارب التي تتعامل مع هذه الخلايا الفريدة. في هذه المدونة ، سأشارك بعض النصائح حول كيفية الحفاظ على صلاحية Tet - 213 خلايا.
أولاً ، دعونا نفهم ما هي Tet - 213 خلايا. إنها نوع من خط الخلايا التي أظهرت إمكانات كبيرة في مجالات البحث المختلفة ، مثل علم الأعصاب ودراسات السرطان. لكن إبقائهم على قيد الحياة والركل ليس دائمًا نزهة في الحديقة.
وسط ثقافة الخلايا
أساس الحفاظ على أي خط خلية هو الوسيلة الثقافة الصحيحة. بالنسبة إلى Tet - 213 خلايا ، فإن الوسيلة ذات الجودة العالية أمر لا بد منه. عادة ما أوصي باستخدام وسيط غني بالمواد المغذية الأساسية. RPMI 1640 المتوسطة ، تستكمل مع 10 ٪ مصل الأبقار الجنيني (FBS) ، البنسلين ، والستربتومايسين ، عملت عجائب بالنسبة لي. يوفر FBS عوامل النمو والهرمونات التي تحتاج هذه الخلايا إلى الازدهار ، في حين تساعد المضادات الحيوية في منع التلوث.
تأكد من تخزين الوسيلة بشكل صحيح. احتفظ به عند 4 درجات مئوية وحمايته من الضوء. قبل استخدامه ، قم بتسخينه حتى 37 درجة مئوية في حمام مائي. هذا يحاكي درجة حرارة الجسم وهو أكثر راحة للخلايا.
ظروف الحضانة
Tet - 213 خلايا من الصعب إرضاءها حول بيئتها. يحبون أن يحضنوا عند 37 درجة مئوية في جو مرطب مع 5 ٪ CO₂. تشبه هذه البيئة عن كثب الظروف الفسيولوجية في جسم الإنسان.
استثمر في حاضنة جيدة. يجب أن يكون لها درجة حرارة مستقرة والتحكم في CO₂. تحقق بانتظام من إعدادات الحاضنة والمعايرة لضمان كل شيء في النظام. أيضا ، قم بتنظيف الحاضنة بانتظام لمنع بناء الملوثات.
الثقافة الفرعية
الزراعة الفرعية هي خطوة مهمة في الحفاظ على صلاحية الخلية. عندما تصل الخلايا Tet - 213 إلى حوالي 80 - 90 ٪ من التقاء ، فقد حان الوقت لتقسيمها. أولاً ، قم بإزالة الوسط القديم وغسل الخلايا باستخدام الفوسفات - محلول ملحي (PBS) للتخلص من أي حطام. ثم ، أضف حل التربسين - EDTA لفصل الخلايا عن قارورة الثقافة. احتضن القارورة عند 37 درجة مئوية لبضع دقائق حتى تبدأ الخلايا في التقريب والفصل.
بمجرد فصل الخلايا ، أضف وسيطًا جديدًا لتحييد التربسين. الطرد المركزي تعليق الخلية بسرعة منخفضة لحيوية الخلايا. إعادة صياغة الحبيبات في وسط جديد ونقل الخلايا إلى قوارير ثقافة جديدة بكثافة البذر المناسبة. عادةً ما تعمل كثافة البذر حوالي 5 × 10⁴ الخلايا/سم مربع بشكل جيد ل Tet - 213 خلايا.
مراقبة صحة الخلية
مراقبة صحة TET - 213 خلية بانتظام أمر بالغ الأهمية. استخدم مرحلة - مجهر التباين للتحقق من مورفولوجيا الخلية. Tet Healthy - 213 خلية يجب أن يكون لها شكل موحد وأن تكون جيدًا - متصلة بالقارورة. إذا لاحظت أي علامات على موت الخلايا ، مثل الخلايا العائمة أو أشكال الخلايا غير الطبيعية ، فقد تكون علامة على مشكلة.
يمكنك أيضًا إجراء اختبار الجدوى ، مثل اختبار استبعاد التريبان الأزرق. امزج كمية صغيرة من تعليق الخلية مع التريبان الأزرق. سوف تستبعد الخلايا الحية الصبغة ، بينما ستأخذها الخلايا الميتة وتظهر باللون الأزرق. عد عدد الخلايا الحية والميتة باستخدام مقياس الكريات الحية لحساب نسبة صلاحية الخلية.
جودة الكواشف
باستخدام الكواشف عالية الجودة غير قابلة للتفاوض. يمكن أن يكون لجودة FBS ، والمضادات الحيوية ، وغيرها من المواد المضافة تأثير كبير على قابلية الخلية. عند اختيار FBS ، ابحث عن دفعة تم اختبارها لقدرتها على دعم نمو الخلايا. تجنب استخدام الكواشف أو الكواشف التي تم تخزينها بشكل غير صحيح.
بعض العوامل الأخرى التي يجب مراعاتها هي الببتيدات التي يمكن استخدامها بالاقتران مع خلايا Tet - 213. على سبيل المثال،بروتين الميلانوشيت PMEL 17 (130 - 138) (الإنسان)وقد أظهرت إمكانات في بعض الأبحاث المتعلقة بالإشارات الخلوية.urechistachinin iوDynorphin A (1 - 17)هي أيضا الببتيدات التي يمكن استكشافها في سياق TET - 213 أبحاث الخلايا.
استكشاف الأخطاء وإصلاحها
إذا كنت تواجه مشكلات في الحفاظ على صلاحية Tet - 213 خلية ، فلا داعي للذعر. فيما يلي بعض المشاكل والحلول الشائعة:
تلوث: إذا رأيت علامات التلوث البكتيري أو الفطري ، مثل الغيوم في المستعمرات المتوسطة أو المرئية ، تجاهل الثقافات الملوثة على الفور. تنظيف الحاضنة وجميع المعدات بدقة. تأكد من اتباع التقنيات المعقمة الصارمة عند التعامل مع الخلايا.
ضعف نمو الخلايا: إذا كانت الخلايا لا تنمو بشكل جيد ، فتحقق من وسط الثقافة. قد يكون الوسيلة قديمة أو أن المكملات الغذائية لا تعمل بشكل صحيح. أيضا ، تأكد من أن ظروف الحضانة صحيحة. في بعض الأحيان ، يمكن أن يؤثر التغير الطفيف في درجة الحرارة أو تركيز CO₂ على نمو الخلايا.
انفصال الخلية: إذا كانت الخلايا تنفصل بسهولة بالغة ، فقد يكون ذلك بسبب الإفراط في التري. تقليل وقت حضانة التربسين في المرة القادمة. أيضا ، تأكد من أن حل التربسين - EDTA جديد.
في الختام ، يتطلب الحفاظ على صلاحية TET - 213 اهتمامًا بالتفاصيل وفهم جيد لاحتياجاتهم. باتباع هذه النصائح ، يمكنك الحفاظ على صحة Tet - 213 خلايا صحية ومنتج.
إذا كنت في السوق من أجل Tet - 213 خلية عالية الجودة ، فأنا أحب الدردشة معك. سواء كنت باحثًا يعمل في مشروع صغير أو شركة حيوية كبيرة الحجم ، يمكنني تزويدك بالخلايا التي تحتاجها. تواصل لبدء محادثة حول متطلباتك وكيف يمكننا العمل معًا.
مراجع
- Freshney ، RI (2016). ثقافة الخلايا الحيوانية: دليل من التقنية الأساسية والتطبيقات المتخصصة. وايلي.
- Doyle ، A. ، & Griffiths ، JB (2012). ثقافة الخلايا والأنسجة: الإجراءات المختبرية. وايلي - بلاكويل.